已經(jīng)普遍到數(shù)大學(xué)實驗室的ELISA技術(shù)，有著重復(fù)性穩(wěn)定及吸附性能好等特點。今天上海恒遠給大家?guī)砹讼嚓P(guān)實驗講座，ELISA試劑盒的五大重要點分析。
1. 靈敏度的要求
根據(jù)我公司技術(shù)人員的分析：如果待測樣本中目標蛋白的濃度比較高，則對靈敏度要求相對小一些。如果待測樣本中目標蛋白的濃度比較低，則必須考慮靈敏度的問題。試劑盒曲線上的zui小濃度是比較準確的，低于這個值因為與曲線是個“S”型結(jié)構(gòu)有關(guān)，所以結(jié)果是有偏差的，是一種估算。再加上實驗誤差，所以達不到理想的效果。建議選擇試劑盒時，應(yīng)該看曲線上zui小的濃度值，而不是試劑盒上寫的靈敏度。
2. 標本復(fù)查
ELISA手工檢測過程復(fù)雜，影響因素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控，也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異，因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準確性的可靠方法，可疑、弱陽性標本及少見模式的檢測結(jié)果進行復(fù)查。
3. 灰區(qū)的設(shè)置
通常情況下，ELISA定性實驗以“陽性”和“陰性”來報告結(jié)果，兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值”(cut-off value，CO值)，這是定性免疫測定結(jié)果報告的依據(jù)。
4. 測試過程請注意：
① 建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
② 試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號的試劑不得混用。
③ 實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
④ 酶標包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
5. 常用的表示結(jié)果方法
① 定性測定
② 半定量測定，結(jié)果一般以滴度表示。
③ 定量測定，即用已知量的標準品作一系列稀釋后進行ELISA測定，繪制標準曲線，結(jié)果以量或單位表示。在ELISA定量檢測中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標準曲線。
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