ELISA實驗中造成假陽性的錯誤操作主要有如下幾點：
1、加樣
對于間接ELISA標本一般都要進行稀釋，如果加樣不準就會造成誤差，尤其當稀釋倍數大時，很小的誤差，會導致較大的相對誤差，使陰性（或弱陽性）標本呈陽性（或陰性）。加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產生氣泡。目前，大部分血站都已使用全自動酶免加樣系統(tǒng)處理標本，可較好地避免以上誤差。
2、洗滌
在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復結果的關健一步，應引起操作者重視。無論是手工操作還是機器操作，得出不正確的結果常與不正確的洗滌有關，ELISA就是靠洗滌來達到分離游離和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結合的物質，以及在反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質。
3、 溫育
每種試劑都有其合適的反應模式，其中溫度和溫育時間控制是重要因素。因孵育溫度高，反應時間長，會造成整板本底高，陽性率高。溫育一般用濕盒或水浴，反應板不宜疊放，以保證各板溫度都能迅速平衡，為避免蒸發(fā)，板上應加蓋。
4、酶標儀判讀
作為記錄測定結果的儀器，酶標儀的性能穩(wěn)定與否，決定結果的可靠度。首先酶標儀應定期進行保養(yǎng)，對濾光片要定期校正；其次酶標儀波長設置要正確，使用雙波長，一個檢測波長，一個參比波長，以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外，在用酶標儀讀數時先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標儀性能有所不同，使用中應詳細閱讀說明書
綜上所述，由于酶聯免疫吸附技術目前在技術上缺乏標準化，盡管目前上以及我國有了部分標準血清或參比血清（血清盤）。但由于受方法學及技術條件的限制，在酶聯吸附測定中有時不可避免的會出現一定的非特異性，但我們可以通過以上措施把非特異性顯色降至低限底，從而提高檢測的特異性，并得到更準確、可靠的實驗結果。
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