鹽析法與抗體的分離純化

鹽析法原理

蛋白質(zhì)的溶解度在必定范圍內(nèi)隨鹽的濃度而改變。在低鹽濃度下溶解度跟著鹽濃度而添加，當(dāng)鹽濃度到達(dá)必定水平常，其溶解度又以不一樣程度降低并先后分出。其原理是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)分子的極性基團(tuán)有著靜電引力，當(dāng)水中參加少數(shù)鹽類時(shí)，鹽類離子與水分子對(duì)蛋白質(zhì)分子上極性基團(tuán)的影響，使蛋白質(zhì)在水中溶解度增大。但鹽濃度添加到必定程度時(shí)，水的活度降低，蛋白質(zhì)外表的電荷被中和，水化膜損壞，致使蛋白質(zhì)分子互相集合而沉積。鹽析法即是依據(jù)不一樣蛋白質(zhì)在必定濃度的鹽溶液中溶解度不一樣而到達(dá)互相別離的辦法。

鹽的挑選

蛋白質(zhì)鹽析常用中性鹽，主要有硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉等。其間使用最-廣的是硫酸銨，其長(zhǎng)處是溫度系數(shù)小，溶解度大（25℃時(shí)飽滿溶解度為4.1mol/L，即767g/L）。在不一樣的飽滿硫酸銨溶液范圍內(nèi)，不一樣蛋白質(zhì)依次分出；并且硫酸銨價(jià)廉易得，分段效果好，不簡(jiǎn)單導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性。

硫酸銨濃溶液的pH常在4.5~5.5之間，市售的硫酸銨還常富含少數(shù)游離硫酸，pH值通常在4.5以下，須用氨水調(diào)節(jié)其pH值至7.0擺布。

鹽析須知

1、鹽的飽滿度：鹽的飽滿度是影響蛋白質(zhì)鹽析的主要因素，不一樣蛋白質(zhì)的鹽析請(qǐng)求鹽的飽滿度不一樣。別離幾個(gè)混合組分的蛋白質(zhì)時(shí)，鹽的飽滿度常由低到高逐步添加，每呈現(xiàn)一種蛋白質(zhì)沉積進(jìn)行離心別離后，再繼續(xù)添加鹽的飽滿度，使第二種蛋白質(zhì)沉積。如用硫酸鹽鹽析別離血漿蛋白，當(dāng)飽滿度到達(dá)20%時(shí)，纖維蛋白原首先分出；飽滿度增至28%~33%時(shí)，優(yōu)球蛋白分出；飽滿度到達(dá)33%~50%時(shí)，球蛋白分出；飽滿度大于50%以上時(shí)，清蛋白分出，免疫球蛋白常在飽滿度在33%開端分出。

2、pH值：在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)溶解度最小，簡(jiǎn)單沉積分出。故鹽析時(shí)除個(gè)別特殊情況外，pH值常挑選在被別離的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)附近。

3、蛋白質(zhì)濃度：在一樣鹽析條件下，蛋白質(zhì)濃度越高越易沉積，高濃度雖對(duì)沉積有利，但濃度過高，也簡(jiǎn)單導(dǎo)致別的蛋白的共沉積，故有必要挑選恰當(dāng)濃度，盡可能避免共沉積效果的攪擾。

4、溫度：因?yàn)楦邼舛鹊柠}溶液對(duì)蛋白質(zhì)有必定保護(hù)效果，鹽析操作一般可在室溫下進(jìn)行，但在使用某些中性鹽進(jìn)行鹽析時(shí)，溫度對(duì)鹽溶解度的影響對(duì)比明顯。

5、脫鹽：蛋白質(zhì)用鹽析沉積別離后，常需求脫鹽才干獲得純品。最-常用的脫鹽辦法是透析。通過透析袋表里的離子交換，最后使透析袋內(nèi)溶液的鹽濃度與外界相一致。