Elisa試劑盒抗原包被選擇

Elisa試劑盒抗原包被選擇
　  獸藥殘留檢測大部分藥物因分子量小，難于直接吸附于固相載體上，因此需要將小分子藥物經(jīng)過改造成合適的半抗原，再將半抗原與大分子的載體蛋白偶聯(lián)（通常是利用半抗原分子中含有一定數(shù)量的游離基團，如巰基、氨基、醛基、羧基、酮基、苯酚基、咪唑基等，這些基團可與蛋白質(zhì)分了中的對應(yīng)基團在偶聯(lián)劑的作用下發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)），從而形成半抗原-載體蛋白復(fù)合物，半抗原-載體蛋白復(fù)合物通過載體蛋白吸附到固相載體上，實現(xiàn)小分子藥物的包被過程。常用的載體蛋白有： 牛血清白蛋白(BSA) 、人血清白蛋白（HSA）、牛的免疫球蛋白（TRP）、雞的卵清蛋（OVA）、血藍(lán)蛋白（KLH）等。  　

    臨床用于包被固相載體的抗原按其來源不同可分為天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原三大類。天然抗原可取自動物組織、微生物培養(yǎng)物等，須經(jīng)提取純化才能作包被用。如HBsAg可以從攜帶者的血清中提取，一般的細(xì)菌和病毒抗原可以從其培養(yǎng)物中提取，蛋白成份抗原可從富含此抗原的材料中提取等（例如AFP從臍帶血或胎肝中提取）。重組抗原是抗原基因在質(zhì)粒體中表達的蛋白質(zhì)抗原，多以大腸桿菌或酵母菌為質(zhì)粒體。重組抗原的優(yōu)點是除工程菌成份外，其他雜質(zhì)少，而且無傳染性，但純化技術(shù)難度較大。以大腸桿菌為質(zhì)粒體的重組抗原如不能充分除大腸桿菌成份，用于ELISA，在反應(yīng)中可出現(xiàn)假陽性，因不少受檢者受大腸桿菌感染而在血清中存在抗大腸桿菌抗體。重組抗原的另一特點是能用基因工程制備某些無法從天然材料中分離的抗原物質(zhì)。例如丙型肝炎病毒（HCV）尚不能培養(yǎng)成功，而且丙肝病人血清中HCV抗原含量極微。目前檢測抗HCV ELISA中所用包被抗原大多為根據(jù)HCV的基因克隆表達而制備的重組抗原。在傳染病診斷中，不少重組抗原如HBsAg、HBeAg和HIV抗原等均在ELISA中取得應(yīng)用。合成多肽抗原是根據(jù)蛋白質(zhì)抗原分子的某一抗原決定簇的氨基酸序列人工合成的多肽片段。多肽抗原一般只含有一個抗原決定簇，純度高，特異性也高，但由于分子量太小，往往難于直接吸附于固相上。多肽抗原的包被一般需先使其與無關(guān)蛋白質(zhì)如牛血清白蛋白質(zhì)（BSA）等偶聯(lián)，借助于偶聯(lián)物與固相載體的吸附，間接地結(jié)合到固相載體表面。應(yīng)用多肽抗原的另一注意點為他僅能檢測與其相應(yīng)的抗體。一種蛋白質(zhì)抗原往往含有多個不同的能引起抗體產(chǎn)生的決定簇，因此在受檢血清中的其他抗體就不能與該多肽抗原發(fā)生反應(yīng)。另外，某些微生物發(fā)生變異時往往發(fā)生抗原結(jié)構(gòu)變化，在這種情況下，用個別多肽抗原進行包被可引起其他抗體的漏檢。