技術(shù)服務：相對定量SYBR Green I 染料法

                                                    相對定量SYBR Green I 染料法

　　熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴增反應中每一個循環(huán)擴增產(chǎn)物量的變化，通過Ct值和標準曲線的分析對起始模板進行定量分析。康為世紀提供利用熒光定量PCR的方法對樣品中的基因表達情況進行相對定量或定量分析的技術(shù)服務。
 

服務價格

服務內(nèi)容
　　相對定量 （mRNA表達量分析）
　　基因表達的研究一般采用相對定量的方法。相對定量法必須對樣品的目的基因和內(nèi)參基因同時分別進行定量，然后求出對于內(nèi)參基因的目的基因的相對量。通過對樣品間的目的基因的相對量進行比較，可以對不同樣品間的mRNA進行表達量分析。內(nèi)參基因通常選用表達量相對恒定的Housekeeping Gene，如：GAPDH、β-actin等。通過同時對內(nèi)參基因的實時檢測，可以對樣品之間由于起始細胞數(shù)不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量誤差進行校正，達到在嚴格意義上對樣品之間的mRNA表達量進行分析之目的。

　　定量　　
　　定量首先必須構(gòu)建與檢測樣品目的基因具有相同序列的標準品，本公司服務內(nèi)容為采用TA克隆的方法構(gòu)建標準品。使用已知濃度的標準品制作5個點以上的標準曲線后，可以使用標準曲線對未知濃度的檢測樣品進行量 （起始拷貝數(shù)）分析。

　　SYBR Green I 染料法
　　SYBR Green I 是一種與雙鏈DNA小溝結(jié)合的熒光染料，SYBR Green I只與雙鏈DNA結(jié)合才能發(fā)出熒光，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，熒光信號與雙鏈DNA分子數(shù)成正比，隨著擴增產(chǎn)物增加而增加，熒光信號的強度代表了反應體系中雙鏈DNA分子的數(shù)量。以SYBR Green I作為檢測信號的熒光定量PCR方法稱為染料法。

　　TaqMan探針法
　　PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團不斷積累，因此熒光強度與擴增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。以Taqman探針作為檢測信號的熒光定量PCR方法稱為探針法。

服務優(yōu)勢
　　·先進的儀器，的試劑，專業(yè)的團隊，實驗結(jié)果更可靠。
　　·免費設(shè)計優(yōu)化引物，使定量PCR反應擴增效率達到90%以上，使相對定量結(jié)果更可靠。

樣品要求
　　客戶需提供組織、細胞、血液等樣品材料，或純化好的總RNA或總DNA，反轉(zhuǎn)錄好的cDNA樣品，具體要求如下：

終產(chǎn)品
　　·一對引物（上游引物和下游引物）及其序列；
　　·完整實驗報告；
　　·
服務說明
　　·客戶提供基因序列。
　　·如因?qū)嶒灢牧系确潜竟驹蛟斐赡硨嶒灢襟E失敗，使實驗提前終止，已啟動的實驗項目仍正常收費。

上海恒遠生物科技有限公司是一家立足于生命科學領(lǐng)域的解決方案提供商，全力打造高品質(zhì)生物試劑產(chǎn)品鏈和技術(shù)服務鏈，致力于提供全方面的解決方案。目前建立了一系列技術(shù)服務平臺。我們致力于每位客戶的滿意和成功，為客戶提供zui有競爭力的產(chǎn)品和解決方案，持續(xù)為客戶創(chuàng)造zui大價值。